【检验原理】

苏木精—伊红染色法简称HE染色法，它是最常用的普通染色方法。苏木精是阳离子染料，将细胞核内的嗜碱性物质染成蓝紫色。伊红是阴离子染料，将细胞质和胶原纤维等染成粉红色。

【样本要求】

1. 适用样本类型:福尔马林固定的石蜡组织切片。

2.包埋及组织切片:组织经石蜡包理后切片, 切片厚度3~5um,粘附在防脱载玻片上，60℃烤片1~2小时。

3.样本的稳定性：为防止抗原丢失，未染色的切片置于室温不宣超过2周，置于2-8℃冰箱不宜概过久。

【检验方法】

1.检测所需仪器、设备和耗材

组织摊烤片机、光学显微镜、计时器、通风橱、玻璃染色缸、耐高温酸碱染色架、免洗盖玻片。

2.试剂配制

1)苏木素—伊红染色液、1%盐酸酒精。

3.实验步骤

1)脱蜡和水化

石蜡切片置于烤片机上65℃烤片2h，然后置于新鲜二甲苯中，2缸, 浸泡10分钟；去除多余的液体后，置于无水乙醇中，2缸，浸泡10分钟;去除多余的液体后, 置于95%乙醇中，1缸，浸泡5分钟;去除多余的液体后，置于85%乙醇中，1缸，浸泡5分钟;去除多余的液体后，置于75%乙醇中，1缸，浸泡5分钟;去除多余的液体后, 置于超纯水中，1缸，浸泡3分钟。

2) 苏木素染色

苏木素染色3～8min，去掉多余的液体，流水冲洗2min。

注意:①需要控制苏木素染色液的染色强度。颜色过浅或过深都会干扰显色结果的观察。

②不要对着组织冲洗，以免把组织冲掉片。

3) 分化返蓝

去掉多余的液体，1%盐酸酒精分化2s，迅速冲洗切片，然后流水冲洗10min。

4) 伊红染色

伊红染色缸中染色5min，去掉多余液体，80%乙醇中，1缸，浸泡3min。

5) 脱水

蒸馏水过洗1—2s，然后置于85%乙醇中，1缸，浸泡3min；去除多余的液体后，置于95%乙醇中，1缸，浸泡3min;去除多余的液体后，置于无水乙醇中，1缸，浸泡3min；去除多余的液体后，置于无水乙醇中，1缸，浸泡5min。

6)透明

去除多余的液体后，置于新鲜二甲苯中，2缸，浸泡5min。

7)封片

取出石蜡切片，去除多余的液体，在石蜡切片的中央滴加适量的中性树胶，盖上盖玻片封固。然后通风橱内室温晾干。

8)结果判读

在光学显微镜下对染色后切片进行现察和结果判读。

正常情况下细胞核染成蓝色，细胞质染成红色。

【注意事项】

1.本试剂需专业人员使用。

2.检测结束后，试剂和样本的处理应符合相关要求。

3.试剂使用中, 应有适当的防护措施，以避免试剂同皮肤和眼睛接触。

【影响染色的可能原因及解决方案】

1. 需要控制苏木素染色液的染色强度。颜色过浅或过深都会干扰显色结果的观察。

2. 流水冲洗时不要对着组织冲洗，以免把组织冲掉片。

3. 1%盐酸酒精分化一定要迅速，不然容易分化过度。

4. 注意溶液的pH值。